(Citometría de fluxo, FCM) é un analizador celular que mide a intensidade de fluorescencia dos marcadores celulares tinguidos. É unha tecnoloxía de alta tecnoloxía desenvolvida baseada na análise e clasificación de células individuais. Pode medir e clasificar rapidamente o tamaño, a estrutura interna, o ADN, o ARN, as proteínas, os antíxenos e outras propiedades físicas ou químicas das células, e pódese basear na colección destas clasificacións.
O citómetro de fluxo consta principalmente das seguintes cinco partes:
1 Cámara de fluxo e sistema fluídico
2 Fonte de luz láser e sistema de conformación do feixe
3 Sistema óptico
4 Sistema electrónico, almacenamento, visualización e análise
5 Sistema de clasificación celular
Entre eles, a excitación láser na fonte de luz láser e no sistema de formación de feixe é a principal medida dos sinais de fluorescencia na citometría de fluxo. A intensidade da luz de excitación e o tempo de exposición están relacionados coa intensidade do sinal de fluorescencia. O láser é unha fonte de luz coherente que pode proporcionar iluminación dunha soa lonxitude de onda, de alta intensidade e de alta estabilidade. É a fonte de luz de excitación ideal para cumprir estes requisitos.
Hai dúas lentes cilíndricas entre a fonte láser e a cámara de fluxo. Estas lentes enfocan un feixe láser cunha sección transversal circular emitida pola fonte láser nun feixe elíptico cunha sección transversal máis pequena (22 μm × 66 μm). A enerxía do láser dentro deste feixe elíptico distribúese segundo unha distribución normal, garantindo unha intensidade de iluminación consistente para as células que pasan pola zona de detección do láser. Por outra banda, o sistema óptico consta de varios conxuntos de lentes, buratos e filtros, que se poden dividir aproximadamente en dous grupos: augas arriba e augas abaixo da cámara de fluxo.
O sistema óptico diante da cámara de fluxo consta dunha lente e un burato. A función principal da lente e o burato (xeralmente dúas lentes e un burato) é enfocar o raio láser cunha sección transversal circular emitida pola fonte láser nun feixe elíptico cunha sección transversal máis pequena. Isto distribúe a enerxía do láser de acordo cunha distribución normal, garantindo unha intensidade de iluminación constante para as células en toda a área de detección do láser e minimizando a interferencia da luz perdida.
Hai tres tipos principais de filtros:
1: Filtro de paso longo (LPF): só permite que pase luz con lonxitudes de onda superiores a un valor específico.
2: Filtro de paso curto (SPF): só permite que pase luz con lonxitudes de onda inferiores a un valor específico.
3: Filtro de paso de banda (BPF): só permite pasar a luz nun intervalo de lonxitude de onda específico.
Diferentes combinacións de filtros poden dirixir sinais de fluorescencia a diferentes lonxitudes de onda a tubos fotomultiplicadores individuais (PMT). Por exemplo, os filtros para detectar fluorescencia verde (FITC) diante do PMT son LPF550 e BPF525. Os filtros utilizados para detectar fluorescencia vermella laranxa (PE) diante do PMT son LPF600 e BPF575. Os filtros para detectar fluorescencia vermella (CY5) diante do PMT son LPF650 e BPF675.
A citometría de fluxo utilízase principalmente para a clasificación celular. Co avance da tecnoloxía informática, o desenvolvemento da inmunoloxía e a invención da tecnoloxía de anticorpos monoclonais, as súas aplicacións en bioloxía, medicina, farmacia e outros campos están cada vez máis estendidas. Estas aplicacións inclúen análise de dinámica celular, apoptose celular, tipificación celular, diagnóstico de tumores, análise de eficacia de fármacos, etc.
Hora de publicación: 21-09-2023
