(Citometría de fluxo, FCM) é un analizador de células que mide a intensidade de fluorescencia dos marcadores de células manchadas. É unha tecnoloxía de alta tecnoloxía desenvolvida en función da análise e clasificación de células individuais. Pode medir e clasificar rapidamente o tamaño, a estrutura interna, o ADN, o ARN, as proteínas, os antíxenos e outras propiedades físicas ou químicas das células e pode basearse na colección destas clasificacións.
O citómetro de fluxo consiste principalmente nas seguintes cinco partes:
1 sistema de cámara de fluxo e fluído
Sistema de conformación de láser de 2 láser
3 sistema óptico
4 Sistema de electrónica, almacenamento, visualización e análise
5 sistema de ordenación de células
Entre eles, a excitación láser no sistema de formación de luz láser e o sistema de formación de feixes é a principal medición de sinais de fluorescencia na citometría de fluxo. A intensidade da luz de excitación e o tempo de exposición están relacionadas coa intensidade do sinal de fluorescencia. O láser é unha fonte de luz coherente que pode fornecer unha lonxitude de onda, unha intensidade de alta intensidade e iluminación de alta estabilidade. É a fonte de luz de excitación ideal para cumprir estes requisitos.
Hai dúas lentes cilíndricas entre a fonte do láser e a cámara de fluxo. Estas lentes céntranse un feixe láser cunha sección circular emitida desde a fonte láser nun feixe elíptico cunha sección transversal máis pequena (22 μM × 66 μM). A enerxía láser dentro deste feixe elíptico distribúese segundo unha distribución normal, garantindo unha intensidade de iluminación consistente para as células que pasan pola área de detección de láser. Por outra banda, o sistema óptico está composto por múltiples conxuntos de lentes, pozos e filtros, que se poden dividir aproximadamente en dous grupos: augas arriba e augas abaixo da cámara de fluxo.
O sistema óptico fronte á cámara de fluxo consta dunha lente e un buraco. A función principal da lente e do foso (normalmente dúas lentes e un foso) é centrar o feixe láser cunha sección transversal circular emitida pola fonte láser nun feixe elíptico cunha sección transversal máis pequena. Isto distribúe a enerxía láser segundo unha distribución normal, garantindo unha intensidade de iluminación consistente para as células da área de detección de láser e minimizando a interferencia da luz perdida.
Hai tres tipos principais de filtros:
1: filtro de paso longo (LPF): só permite que a luz con lonxitudes de onda superior a un valor específico.
2: Filtro de paso curto (SPF) - Só permite pasar a luz con lonxitudes de onda por debaixo dun valor específico.
3: Filtro de paso de banda (BPF): só permite pasar a luz nun rango de lonxitude de onda específica.
Diferentes combinacións de filtros poden dirixir sinais de fluorescencia a diferentes lonxitudes de onda a tubos de fotomultiplicadores individuais (PMTs). Por exemplo, os filtros para detectar a fluorescencia verde (FITC) fronte ao PMT son LPF550 e BPF525. Os filtros empregados para detectar a fluorescencia vermella laranxa (PE) fronte ao PMT son LPF600 e BPF575. Os filtros para detectar a fluorescencia vermella (CY5) fronte ao PMT son LPF650 e BPF675.
A citometría de fluxo úsase principalmente para a clasificación de células. Co avance da tecnoloxía informática, o desenvolvemento da inmunoloxía e a invención da tecnoloxía de anticorpos monoclonais, as súas aplicacións en bioloxía, medicina, farmacia e outros campos están cada vez máis estendidas. Estas aplicacións inclúen a análise de dinámicas celulares, a apoptose celular, a dixitación celular, o diagnóstico do tumor, a análise de eficacia dos medicamentos, etc.
Tempo de publicación: setembro 21-2023
