(A citometría de fluxo, FCM) é un analizador celular que mide a intensidade de fluorescencia dos marcadores celulares tinguidos. Trátase dunha tecnoloxía de alta tecnoloxía desenvolvida baseada na análise e clasificación de células individuais. Pode medir e clasificar rapidamente o tamaño, a estrutura interna, o ADN, o ARN, as proteínas, os antíxenos e outras propiedades físicas ou químicas das células, e pode basearse na recompilación destas clasificacións.
Un citómetro de fluxo consta principalmente das seguintes cinco partes:
1 Cámara de fluxo e sistema de fluídicos
2 Fonte de luz láser e sistema de conformación do feixe
3 Sistema óptico
4 Sistema electrónico, de almacenamento, de visualización e de análise
5 Sistema de clasificación celular
Entre elas, a excitación láser na fonte de luz láser e no sistema de formación de feixes é a principal medición dos sinais de fluorescencia na citometría de fluxo. A intensidade da luz de excitación e o tempo de exposición están relacionados coa intensidade do sinal de fluorescencia. O láser é unha fonte de luz coherente que pode proporcionar iluminación de lonxitude de onda única, alta intensidade e alta estabilidade. É a fonte de luz de excitación ideal para cumprir estes requisitos.
Hai dúas lentes cilíndricas entre a fonte láser e a cámara de fluxo. Estas lentes enfocan un feixe láser cunha sección transversal circular emitido pola fonte láser nun feixe elíptico cunha sección transversal menor (22 μm × 66 μm). A enerxía láser dentro deste feixe elíptico distribúese segundo unha distribución normal, o que garante unha intensidade de iluminación consistente para as células que pasan pola área de detección do láser. Por outra banda, o sistema óptico consta de varios conxuntos de lentes, buratos de esteno e filtros, que se poden dividir aproximadamente en dous grupos: augas arriba e augas abaixo da cámara de fluxo.
O sistema óptico situado diante da cámara de fluxo consta dunha lente e un orificio estenógrafo. A función principal da lente e do orificio estenógrafo (xeralmente dúas lentes e un orificio estenógrafo) é enfocar o feixe láser cunha sección transversal circular emitido pola fonte láser nun feixe elíptico cunha sección transversal menor. Isto distribúe a enerxía láser segundo unha distribución normal, garantindo unha intensidade de iluminación consistente para as células en toda a área de detección do láser e minimizando a interferencia da luz dispersa.
Hai tres tipos principais de filtros:
1: Filtro de paso longo (LPF): só permite o paso da luz con lonxitudes de onda superiores a un valor específico.
2: Filtro de paso curto (SPF): só permite o paso da luz con lonxitudes de onda inferiores a un valor específico.
3: Filtro de paso de banda (BPF): só permite o paso da luz nun rango de lonxitudes de onda específico.
Diferentes combinacións de filtros poden dirixir sinais de fluorescencia a diferentes lonxitudes de onda a tubos fotomultiplicadores (PMT) individuais. Por exemplo, os filtros para detectar fluorescencia verde (FITC) diante do PMT son o LPF550 e o BPF525. Os filtros utilizados para detectar fluorescencia vermella-alaranxada (PE) diante do PMT son o LPF600 e o BPF575. Os filtros para detectar fluorescencia vermella (CY5) diante do PMT son o LPF650 e o BPF675.
A citometría de fluxo utilízase principalmente para a clasificación celular. Co avance da tecnoloxía informática, o desenvolvemento da inmunoloxía e a invención da tecnoloxía de anticorpos monoclonais, as súas aplicacións en bioloxía, medicina, farmacia e outros campos están a estenderse cada vez máis. Estas aplicacións inclúen a análise da dinámica celular, a apoptose celular, a tipificación celular, o diagnóstico de tumores, a análise da eficacia de fármacos, etc.
Data de publicación: 21 de setembro de 2023
